ГОСТ Р 72026-2025 Клинические лабораторные исследования. Метод полимеразной цепной реакции в реальном времени для выявления первичных иммунодефицитных состояний и спинальной мышечной атрофии в образцах сухих пятен крови

ГОСТ Р 72026-2025

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

КЛИНИЧЕСКИЕ ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Метод полимеразной цепной реакции в реальном времени для выявления первичных иммунодефицитных состояний и спинальной мышечной атрофии в образцах сухих пятен крови

Clinical laboratory testing. Real-time PCR assay for the detection of primary immune deficiency diseases and spinal muscular atrophy in dried blood samples

ОКС 11.100.99

Дата введения 2025-10-01

Предисловие

1 РАЗРАБОТАН Ассоциацией специалистов и организаций лабораторной службы "Федерация лабораторной медицины" (Ассоциация "ФЛМ")

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 380 "Клинические лабораторные исследования и диагностические тест-системы ин витро"

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 18 апреля 2025 г. № 320-ст

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Правила применения настоящего стандарта установлены в статье 26 Федерального закона от 29 июня 2015 г. № 162-ФЗ "О стандартизации в Российской Федерации". Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе "Национальные стандарты", а официальный текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.rst.gov.ru)

Введение

Использование неонатального скрининга для выявления первичных иммунодефицитных состояний (ПИД) и спинальной мышечной атрофии (СМА) представляет собой новый рубеж в области общественного здравоохранения и эпидемиологических исследований.

ПИД - жизнеугрожающие заболевания с выраженной генетической гетерогенностью, в основе которых лежат дефекты различных звеньев иммунитета. На настоящий момент известно почти 500 генов, ассоциированных с развитием клинически значимых иммунологических дефектов.

Представления о распространенности ПИД в популяции непрерывно пересматриваются по мере накопления новых данных. Еще недавно ПИД считались крайне редкими заболеваниями, но в последние годы их частоту оценивают как минимум одно на 10 тыс. населения. Группа ПИД объединяет более 450 диагнозов. Тяжелые формы ПИД приводят к летальным исходам в первые два года жизни. Менее тяжелые формы вызывают необратимые изменения в организме, которые значительно снижают качество жизни человека и приводят к инвалидизации.

Выявление наиболее тяжелых форм ПИД с помощью неонатального скрининга, до развития инфекционных поражений, позволит значительно улучшить прогноз пациентов с тяжелыми формами ПИД и уменьшить младенческую и детскую смертность в целом.

СМА - наследуемое нервно-мышечное генетическое заболевание, вызывающее поражение двигательных нейронов передних рогов спинного мозга. СМА одно из наиболее распространенных наследуемых заболеваний в мире, в среднем наблюдается у одного из 7500 новорожденных. У подавляющего большинства пациентов причиной СМА является гомозиготная делеция 7 экзона в гене SMN1 хромосомы 5. Гетерозиготы по этой делеции не проявляют признаков заболевания, но являются основными носителями заболевания в популяции.

В программу расширенного неонатального скрининга в Российской Федерации кроме наследственных болезней обмена веществ, с 2023 г. включены СМА и ПИД. Лабораторная диагностика ПИД на доклинической стадии возможна с помощью количественного определения маркеров Т- и В-клеточного лимфопоэза (TREC и KREC), а также СМА качественным выявлением делеции 7 экзона гена SMN1 методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ) с использованием зарегистрированных медицинских изделий для диагностики in vitro.

Лабораторная диагностика количественного определения TREC, KREC и качественного выявления делеции 7 экзона гена SMN1 из образцов СПК включает в себя две стадии:

1) выделение ДНК из исследуемых образцов, может включать лизис образцов, сорбцию ДНК на магнитные частицы, отмывки и элюцию;

2) амплификация методом ПЦР в реальном времени с использованием специфических праймеров и гибридизационных зондов.

TREC и KREC - это кольцевидные фрагменты ДНК, продукты формирования рецепторов Т- и В-клеток, которые сигнализируют о созревании Т- и В-лимфоцитов соответственно. Они сопровождают созревание практически всех Т- и В-лимфоцитов и служат маркерами их количества. Снижение количества TREC указывает на дефект в дифференцировании Т-клеток. Скорее всего, у такого ребенка будут проблемы с развитием клеточного иммунного ответа. Снижение количества KREC сигнализирует о дефекте в развитии В-клеток, который связан с неспособностью полноценно вырабатывать антитела в ответ на инфекцию и вакцинацию.

Мировой опыт использования количественного определения TREC в неонатальном скрининге начинается с 2005 г. и показывает высокую эффективность определения TREC в сухих пятнах крови для диагностики тяжелой комбинированной иммунной недостаточности (ТКИН) у новорожденных детей.